THP-1 （人單核細胞白血病）細胞作為人單核細胞白血病細胞系的代表，其獲取、引入實驗室并成功建立穩定培養體系，是一個需要周密計劃和規范操作的過程。本指南聚焦于從資源選擇、采購驗證、復蘇建立到日常管理的全流程，旨在幫助研究者高效、可靠地獲得這一重要的研究工具。
 

　　一、接收準備與細胞復蘇

　　在細胞送達前，必須完成所有準備工作：

　　1.設備與試劑準備：確保CO?培養箱、生物安全柜、離心機、水浴鍋/細胞復蘇儀、倒置顯微鏡狀態正常。準備齊全的培養基、PBS、胎牛血清、DMSO、細胞凍存管、血球計數板、臺盼藍染液等。所有液體需預溫至37°C（除凍存液）。

　　2.嚴格無菌操作：所有操作在生物安全柜中進行，遵循無菌原則，穿戴個人防護裝備。

　　3.標準化復蘇流程：

　　?快速解凍：從液氮罐或干冰中取出凍存管，立即放入37°C水浴中，輕柔晃動使其在1分鐘內全融化。

　　?稀釋與離心：將細胞懸液轉移至含5-10倍體積預溫培養基的離心管中，輕柔混勻，以300g離心5分鐘。

　　?重懸與接種：棄上清，用適量新鮮培養基輕柔重懸細胞沉淀，接種于合適的培養容器（如T25培養瓶）中。初始接種密度建議參考供應商指南，通常為3-5×10?cells/mL。

　　?培養觀察：將培養瓶放入37°C、5%CO?培養箱。復蘇后24小時，在顯微鏡下觀察細胞形態、存活情況，并半量換液，去除死細胞和DMSO。

　　二、擴增培養與穩定建系

　　•適應與擴增：復蘇后的細胞可能需要幾代時間適應新的培養環境。保持規律換液和傳代，維持細胞在對數生長期。當細胞穩定增殖、形態典型、活力良好時，可進行擴增。

　　•建庫與凍存：在細胞狀態最佳、處于對數生長期時，建立主細胞庫和工作細胞庫。凍存液通常為含10%DMSO的培養基。采用程序性降溫，最終保存于液氮氣相中長期儲存。詳細記錄凍存信息（代數、日期、密度、位置）。

　　•質量控制：在MCB建立后，應進行一次全面的STR鑒定和支原體檢測。后續從WCB復蘇的細胞，也應定期（如每3-6個月）進行支原體檢測。

　　三、日常維持、傳代與記錄

　　•維持培養：使用標準化配方的培養基。保持細胞密度在2×10?至1×10?cells/mL，每2-3天傳代一次。傳代時輕柔吹打，避免產生過多剪切力。記錄傳代歷史（日期、代數、接種密度、形態觀察）。

　　•狀態監控：定期在顯微鏡下觀察細胞形態（應為均勻圓形、透亮、大小均一）、檢測活力（通常>95%）。注意是否有貼壁細胞（提示可能自發分化）、細胞團塊增多、碎片增加等異常現象。

　　四、問題排查與資源管理

　　•常見問題：生長緩慢、活力下降、自發分化、污染等。需系統排查原因：培養基/血清問題、培養箱條件、污染、操作不當等。建立標準操作程序可減少人為誤差。

　　•資源管理：妥善管理細胞庫，實行雙人雙鎖或電子管理系統，防止誤取或丟失。建立細胞使用和共享的內部規范。對實驗人員進行全面培訓。

　　成功獲取并建立THP-1細胞系，是一個始于嚴謹的供應商和產品選擇，貫穿于標準化的復蘇、培養、凍存操作，并依賴于持續的質量控制和規范管理的過程。將細胞視為寶貴的、有生命的實驗材料，投入必要的資源和精力進行精細化管理，是保障后續研究成果可靠性、可重復性的基礎。一個健康、穩定、身份明確的THP-1細胞庫，是相關研究項目順利推進的堅實起點。