本試劑盒針對大鼠骨髓來源內皮祖細胞（Endothelial Progenitor Cells, EPCs）的分離與培養設計，提供從骨髓采集到原代細胞擴增的全流程解決方案。內皮祖細胞在血管新生、缺血組織修復及心血管疾病研究中具有重要價值，本產品通過優化試劑配方與操作流程，可高效獲取高活性、高純度的EPCs，適用于血管生物學、再生醫學及藥物篩選等領域。

產品組成

試劑盒包含以下核心組件，所有組件均標注規格（3Tests/10Tests）、儲存條件及有效期：

• 大鼠骨髓來源內皮祖細胞專用清洗液
  規格：3Tests（250 mL）；10Tests（500 mL×2）
  儲存條件：2-8℃
  有效期：12個月
  功能：含緩沖體系與抗生素，清除骨髓樣本中的血液成分及雜質，減少污染風險。

• 大鼠骨髓來源內皮祖細胞專用裂解液
  規格：3Tests（15 mL）；10Tests（50 mL）
  儲存條件：2-8℃
  有效期：12個月
  功能：特異性裂解紅細胞，保留白細胞及內皮祖細胞，提升目標細胞純度。

• 大鼠骨髓來源內皮祖細胞基礎培養基
  規格：3Tests（100 mL）；10Tests（300 mL）
  儲存條件：2-8℃
  有效期：12個月
  功能：含氨基酸、維生素及無血清成分，維持細胞基礎代謝需求。

• 大鼠骨髓來源內皮祖細胞添加劑
  規格：3Tests（10 mL）；10Tests（30 mL）
  儲存條件：-5~-20℃
  有效期：12個月
  功能：含重組人血管內皮生長因子（VEGF）、成纖維細胞生長因子（FGF）及抗氧化劑，促進EPCs增殖與血管內皮表型維持。

• 70 μm細胞濾網
  規格：3Tests（3個）；10Tests（10個）
  儲存條件：常溫
  有效期：36個月
  功能：過濾骨髓碎片及未消化組織，獲得單細胞懸液。

實驗流程

實驗準備

自備器材：

• 手術器械（眼科剪×3、直鑷×3、彎鑷×3）、2 mL注射器、6 cm/10 cm培養皿、T25培養瓶、泡沫解剖板、注射器針頭（18G-22G）、15 mL/50 mL離心管。

預處理建議：

• 正式實驗前使用1-2只正常大鼠進行骨髓采集模擬訓練，優化沖洗與過濾操作速度。

操作步驟

1. 骨髓采集與清洗 

• 解剖取大鼠股骨與脛骨，用2 mL注射器吸取預冷清洗液，通過針頭反復沖洗骨髓腔至骨骼發白，收集骨髓懸液。

• 4℃離心（300g，5min），棄上清，重復清洗1次以去除脂肪與血液成分。

2. 紅細胞裂解 

• 加入預溫至37℃的裂解液，輕柔吹打混勻后靜置5min，終止裂解反應。

• 4℃離心（300g，5min），棄上清，用基礎培養基重懸細胞沉淀。

3. 過濾與接種 

• 細胞懸液經70μm濾網過濾，去除骨碎片與細胞團塊，收集濾液。

• 計數后調整密度至1×10? cells/mL，接種至T25培養瓶，添加基礎培養基與添加劑（體積比100:1）。

4. 培養與鑒定 

• 置于37℃、5% CO?培養箱中培養，每2天換液。通過流式細胞術檢測CD34?/VEGFR2?細胞比例（>85%為合格）。

注意事項

1. 骨髓沖洗技巧 

• 使用18G針頭可提高沖洗效率，避免過度用力導致骨髓稀釋。

2. 裂解時間控制 

• 過度裂解會損傷EPCs，建議通過顯微鏡觀察懸液顏色（由紅色變為淡粉色時終止）。

3. 添加劑使用 

• 基礎培養基與添加劑需現用現混，避免光照降解生長因子。

常見問題解答

Q1：培養后細胞貼壁率低如何處理？
A：檢查培養基是否漏加添加劑，或嘗試在接種時添加纖連蛋白（5μg/cm2）促進貼壁。

Q2：如何區分內皮祖細胞與成熟內皮細胞？
A：內皮祖細胞呈圓形或簇狀生長，可檢測其攝取乙酰化低密度脂蛋白（DiL-Ac-LDL）的能力及管腔形成潛能。

儲存與運輸

• 低溫組件（裂解液、添加劑）：冰袋運輸，收到后立即存于-20℃。

• 常溫組件（濾網）：干燥避光保存。

• 開封后建議：清洗液與基礎培養基4℃保存并于2周內用完；裂解液與添加劑分裝后-20℃保存，避免反復凍融。

產品優勢
? 專用配方：針對EPCs生物學特性設計，兼顧細胞活性與純度
? 操作簡化：預分裝試劑減少配制步驟，2小時內完成從取材到接種
? 性能驗證：經流式細胞術與功能實驗（管腔形成）雙重質控，確保細胞質量