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通常情況下，細(xì)胞在體外培養(yǎng)環(huán)境中大多呈現(xiàn)扁平、多角形或圓形等形態(tài)，這些細(xì)胞形態(tài)對(duì)于細(xì)胞的營(yíng)養(yǎng)吸收、分裂增殖及物質(zhì)轉(zhuǎn)運(yùn)等生理活動(dòng)至關(guān)重要。然而，不少研究者在實(shí)際培養(yǎng)過(guò)程中會(huì)遇到細(xì)胞形態(tài)異常的問(wèn)題，尤其是細(xì)胞出現(xiàn)“拉絲"現(xiàn)象。這一現(xiàn)象，往往伴隨細(xì)胞狀態(tài)變差，對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性及實(shí)驗(yàn)進(jìn)展構(gòu)成了不容忽視的影響。
本期細(xì)胞學(xué)堂，我們將為您詳細(xì)介紹細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中出現(xiàn)拉絲現(xiàn)象可能的原因，并針對(duì)性提供解決方法，助您細(xì)胞培養(yǎng)無(wú)憂！
某些細(xì)胞株在正常培養(yǎng)過(guò)程中，如SH-SY5Y（人神經(jīng)母細(xì)胞瘤細(xì)胞）和K7M2 wt（小鼠骨肉瘤成骨細(xì)胞），通過(guò)光學(xué)顯微鏡觀察（如圖1和2所示），細(xì)胞本身形態(tài)就有拉絲和觸角狀形態(tài)，是其正常形態(tài)。
圖1. SH-SY5Y細(xì)胞形態(tài)
圖2. K7M2 wt細(xì)胞形態(tài)
解決方法：
在初次培養(yǎng)不熟悉的細(xì)胞過(guò)程中，若觀察到拉絲現(xiàn)象，首先建議參考權(quán)-威細(xì)胞庫(kù)提供的細(xì)胞圖片，以鑒別該細(xì)胞本身是否具有拉絲的形態(tài)特征。對(duì)于本身形態(tài)就存在拉絲特征的這類細(xì)胞，無(wú)需針對(duì)拉絲現(xiàn)象進(jìn)行特殊處理。然而，如果經(jīng)過(guò)對(duì)比明確細(xì)胞本身不具有拉絲的形態(tài)特征，且伴隨有細(xì)胞增殖變慢或其他改變時(shí)，那么就需要進(jìn)一步排查可能的原因。
細(xì)胞接種密度過(guò)高時(shí)，細(xì)胞之間的營(yíng)養(yǎng)和空間競(jìng)爭(zhēng)會(huì)加劇，這種競(jìng)爭(zhēng)壓力可能導(dǎo)致細(xì)胞形態(tài)拉絲。若使用無(wú)血清培養(yǎng)基培養(yǎng)間充質(zhì)干細(xì)胞，接種密度過(guò)低，也可能導(dǎo)致細(xì)胞長(zhǎng)不起來(lái)，細(xì)胞形態(tài)會(huì)逐漸伸長(zhǎng)拉絲。
解決方法：
根據(jù)細(xì)胞的特性，選擇合適的接種密度，并定期進(jìn)行細(xì)胞傳代，將細(xì)胞密度維持在合適范圍內(nèi)。
如培養(yǎng)基配方錯(cuò)誤、培養(yǎng)基中關(guān)鍵營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)（如氨基酸、維生素、生長(zhǎng)因子等）不足、pH值變化、溫度波動(dòng)或氣體環(huán)境（如CO?濃度）不適宜，均可能影響細(xì)胞正常形態(tài)與功能，導(dǎo)致細(xì)胞拉絲。
解決方法：
使用新鮮配制的培養(yǎng)基培養(yǎng)細(xì)胞；根據(jù)細(xì)胞的生長(zhǎng)情況，及時(shí)換液，確保培養(yǎng)過(guò)程中營(yíng)養(yǎng)充足；必要時(shí)可嘗試提高血清使用濃度（終濃度不超過(guò)20%）或更換高品質(zhì)胎牛血清（如圖3所示）。
圖3. Renca（小鼠腎癌細(xì)胞）細(xì)胞形態(tài)
在處理如貼壁細(xì)胞等需要消化的細(xì)胞時(shí)，解離試劑的選擇、消化時(shí)間的控制、操作力度的把握等都至關(guān)重要。解離試劑選擇不當(dāng)、消化時(shí)間過(guò)長(zhǎng)或操作力度過(guò)大等均可能導(dǎo)致細(xì)胞受損，進(jìn)而引發(fā)細(xì)胞形態(tài)改變，出現(xiàn)拉絲現(xiàn)象。
解決方法：
針對(duì)不同細(xì)胞選擇合適的解離試劑，控制消化時(shí)間，在消化過(guò)程中操作輕柔，最-大程度降低消化過(guò)程對(duì)細(xì)胞的損傷。
在細(xì)胞培養(yǎng)的過(guò)程中，若出現(xiàn)細(xì)菌、真菌、支原體、黑膠蟲(chóng)等污染，其與細(xì)胞爭(zhēng)奪營(yíng)養(yǎng)，同時(shí)產(chǎn)生有細(xì)胞毒性的代謝產(chǎn)物，將會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞狀態(tài)明顯變差，細(xì)胞可能出現(xiàn)拉絲現(xiàn)象。
解決方法：
提高細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中的無(wú)菌操作意識(shí)，使用無(wú)菌試劑、耗材。對(duì)于支原體、黑膠蟲(chóng)等不易察覺(jué)的污染，可以定期檢測(cè)或空培確定是否發(fā)生污染。及時(shí)發(fā)現(xiàn)，及時(shí)處理，有效防止污染范圍的擴(kuò)大。
以上就是關(guān)于細(xì)胞拉絲原因及解決方法的詳細(xì)解讀，更多細(xì)胞培養(yǎng)干貨，請(qǐng)持續(xù)關(guān)注細(xì)胞學(xué)堂專欄~
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